Polecenie 1

Przeprowadzono doświadczenie w wirtualnym laboratorium biologicznym. Na podstawie jego opisu rozwiąż problem badawczy i zweryfikuj hipotezę.

Temat: Izolacja chloroplastów z liści szpinaku.

Problem badawczy: Jaką gęstość wykazują chloroplasty podczas frakcjonowania ich z zastosowaniem wirowania w roztworze sacharozy?

Hipoteza:

Po wirowaniu wyizolowano chloroplasty tworzące ciemnozieloną warstwę roztworu na wysokości odpowiadającej połowie gradientu gęstości roztworu sacharozy.

Materiał biologiczny:

liście szpinaku

Sprzęt:

homogenizator
stoper laboratoryjny
kuweta z lodem
zlewka
filtr bibułowy
probówki dedykowane do wirówki typu falcon
automatyczna pipeta

Odczynniki:

bufor do homogenizacji
bufor do płukania
percoll
woda

Instrukcja wykonania doświadczenia

Młode liście szpinaku umieszczono w homogenizatorze. Uzupełniono buforem do homogenizacji.
Homogenizowano przez 30 s.
Homogenat przelano przez filtr do zlewki.
Przelano przesączony homogenat ze zlewki do czterech probówek typu falcon, dedykowanych do wirówki.
Ustawiono odpowiednie parametry na wirówce: 200 × g w 4°C przez 3 min. wirowano.
Uzyskano w wyniku wirowania supernatant przeniesiony za pomocą automatycznej pipety z odpowiednią końcówką do nowej probówki.
Wirowano przy 1000 × g w 4°C przez 7 min.
Delikatnie zlano supernatant znad osadu do zlewki tak, aby nie wzruszył osadu.
Próbówkę z osadem uzupełniono buforem. Rozmieszano osad w buforze przez kilkukrotne zaciągnięcie osadu do pipety i ponowne wprowadzanie go do probówki.
Zlano zawieszony w buforze osad ze wszystkich probówek do jednej probówki.
Do nowej probówki dodano Percoll, bufor i osad zawieszony w buforze.
Do nowej probówki wlano taką samą objętość wody.
Wirowano przy 1700 × g w 4°C przez 6 min.
Zaobserwowano rozwarstwienie roztworu.