bg‑orange

E‑materiały powiązane z tematem

bg‑orange

Obserwacje mikroskopowe

Do obserwacji struktur tkankowych i komórkowych używa się głównie mikroskopów (z gr. mikros – mały, skopeo – patrzę, obserwuję) – przyrządów optycznych pozwalających na otrzymywanie powiększonych obrazów obiektów niewidocznych gołym okiem.

Ciekawostka

Wynalezienie mikroskopu najczęściej przypisuje się dwóm Holendrom – Hansowi i Zachariaszowi Janssenom (ojcu i synowi) – którzy na przełomie XVI i XVII w. skonstruowali urządzenie składające się z dwóch soczewek zamocowanych na obu końcach rury. Przyrząd ten, zwany mikroskopem sprzężonym, pozwalał na zaledwie 10‑krotne powiększenie obserwowanego obiektu. Obserwacja komórek stała się możliwa nieco później – w połowie XVII w. – dzięki wynalezieniu mikroskopu optycznego (świetlnego) przez angielskiego przyrodnika i eksperymentatora Roberta Hooke’a (1635–1703).

Współcześnie najczęściej stosowanymi mikroskopami są: mikroskopy optyczne (świetlne), mikroskopy fluorescencyjne oraz mikroskopy elektronowe.

Mikroskopy optyczne (świetlne)
  • Do wytworzenia obrazu badanego obiektu i jego powiększenia wykorzystywane są promienie świetlne, które docierają do układu optycznego, tworzonego przez zestaw soczewek optycznych umieszczonych w obiektywie i okularze. Niektóre elementy układu optycznego są ruchome, dzięki czemu można tak manipulować wytworzonym obrazem, aby był optymalnie wyraźny.

  • Najnowocześniejsze mikroskopy optyczne pozwalają na osiągnięcie 1500‑krotnego powiększenia, przy maksymalnej rozdzielczości na poziomie 0,2 µm.

  • Mikroskopy optyczne są bardzo przydatne w badaniach biologicznych: pozwalają na obserwację zarówno żywych komórek (ich ruchu lub procesów w nich zachodzących, np. podziałów komórkowych), jak i martwych komórek (w tym celu sporządza się z nich preparaty, po uprzednim utrwaleniu i wybarwieniu).

  • Szczególnym rodzajem mikroskopu optycznego jest mikroskop kontrastowo‑fazowy, którego działanie opiera się na zjawisku interferencjiinterferencja falinterferencji fal świetlnych i przesunięcia fazowegoprzesunięcie fazoweprzesunięcia fazowego światła przy przejściu przez obserwowany preparat, dzięki czemu pozwala na obserwację żywych, nieutrwalonych preparatów biologicznych.

Mikroskopy fluorescencyjne
  • Mikroskop fluorescencyjny jest odmianą mikroskopu optycznego: także wykorzystuje promienie świetlne do wytworzenia obrazu oraz jest wyposażony w układ optyczny, ale jego działanie określają zjawiska fluorescencjifluorescencjafluorescencjifosforescencjifosforescencjafosforescencji.

  • Preparaty przygotowywane do obserwacji poddaje się działaniu barwników fluorescencyjnych (tzw. znaczników fluorescencyjnych lub fluorochromów). Obraz obiektu obserwowanego za pomocą mikroskopu fluorescencyjnego przypomina negatyw obrazu z konwencjonalnego mikroskopu optycznego: barwne struktury są widoczne na ciemnym tle.

  • Mikroskopy fluorescencyjne pozwalają na takie samo maksymalne powiększenie i taką samą rozdzielczość jak mikroskopy optyczne.

  • Szczególnym rodzajem mikroskopu fluorescencyjnego jest mikroskop konfokalny, wykorzystujący jako źródło promieniowania wiązkę laserową skanującą preparatpreparat mikroskopowypreparat. Obraz obserwowanego obiektu jest silnie kontrastowy – charakteryzuje się ostrymi konturami zabarwionych struktur. Ten typ mikroskopu umożliwia ponadto uzyskiwanie obrazów w formie elektronicznej, dzięki czemu mogą być one trójwymiarowe.

  • Mikroskopy fluorescencyjne są szczególnie przydatne podczas obserwacji wybranych komórek lub struktur komórkowych, które wcześniej zostały zabarwione. Ta cecha mikroskopów fluorescencyjnych jest wykorzystywana m.in. w okulistyce (np. w czasie badania rogówkirogówkarogówki, podczas którego wykorzystuje się mikroskopię konfokalną). Z pomocą mikroskopów fluorescencyjnych prowadzi się również analizy ilościowe.

Mikroskopy elektronowe
  • Powiększony obraz badanego obiektu otrzymuje się przy użyciu oddziałującego z nią strumienia elektronów, uformowanego przez soczewki elektromagnetyczne. Rozróżnia się dwa główne rodzaje mikroskopów elektronowych: mikroskop elektronowy transmisyjny (ang. transmission electron microscope, TEM) oraz mikroskop elektronowy skaningowy (ang. scanning electron microscope, SEM).

  • Transmisyjny mikroskop elektronowy (TEM) pozwala na uzyskanie powiększenia obrazu 1 000 000 razy przy zdolności rozdzielczej na poziomie 0,2 nm. Preparat barwi się związkami metali ciężkich (np. ołowiu, uranu), aby zwiększyć kontrast struktur komórki zróżnicowanych pod względem powinowactwa do jonów tych metali. Uzyskany obraz jest dwuwymiarowy.

  • Skaningowy mikroskop elektronowy (SEM) pozwala na obserwację trójwymiarowej topografii powierzchni przedmiotów powiększonych nawet 4 000 000 razy przy maksymalnej rozdzielczości 1 nm. Obserwowane przedmioty na całej powierzchni badanej próbki pokrywa się cienką warstwą wybranych metali szlachetnych.

  • Mikroskopy elektronowe stosuje się do obserwacji struktur komórkowych, białek, wirusów i małych cząsteczek (ze względu na możliwość uzyskania bardzo dużego powiększenia i dużej rozdzielczości, a w przypadku SEM – trójwymiarowych obrazów). Mikroskopów tego rodzaju nie można jednak wykorzystać do obserwacji żywych komórek. Należy także zauważyć, że uzyskany obraz martwych struktur może odbiegać od obrazu żywych obiektów, a ponadto jest on pozbawiony naturalnej ich barwy (obiekty na zdjęciach mikroskopowych albo są przedstawione w skali szarości, albo też zostają pokolorowane już po wykonaniu fotografii).

Więcej na temat mikroskopów i mechanizmów ich działania w e‑materiale Rodzaje mikroskopów używanych w badaniach biologicznychPMvl58tTBRodzaje mikroskopów używanych w badaniach biologicznych.

W obserwacji mikroskopowej komórki i ich elementy nie wykazują różnic w absorpcji promieniowania elektromagnetycznego, co przekłada się na brak wyraźnego kontrastu między poszczególnymi elementami. Nie ma więc możliwości rozróżnienia szczegółów budowy danej tkanki czy też elementów komórki. Z tego powodu w preparatach mikroskopowych niezbędne jest zastosowanie barwników histologicznych, które wybarwiają komórki wraz z ich elementami strukturalnymi, a tym samym umożliwiają ich dokładną obserwację i identyfikację.

bg‑orange

Badania parazytologiczne

Materiałem diagnostycznym do badań parazytologicznych w zależności od gatunku i formy rozwojowej pasożyta mogą być m.in.:

  • kał;

  • wymaz z powierzchni skóry i błon śluzowych;

  • krew;

  • mocz i wydzielina z dróg moczowo‑płciowych;

  • płyn mózgowo‑rdzeniowy;

  • materiał pobrany z torbieli lub ropni wątroby, płuc, ze zmian skórnych;

  • wycinki tkanek, części usuniętego chirurgicznie narządu.

bg‑gray2

Badania mikroskopowe kału

W badaniu mikroskopowym kału ocenia się obecność cyst pierwotniaków, jaj i postaci dorosłych pasożytów. Pobrany materiał może służyć do wykonania odpowiedniego barwienia, ułatwiającego analizę i poszukiwanie specyficznych białek.

bg‑gray2

Badania mikroskopowe krwi

W mikroskopowym badaniu parazytologicznym krwi, w odróżnieniu od badania kału, poszukuje się określonego pasożyta. Badanie to ma znaczenie w diagnostyce chorób wywoływanych przez pasożyty bytujące we krwi (m.in. malarii, babeszjozy, śpiączki afrykańskiej, choroby Chagasa). W rozmazach ocenia się, na podstawie cech morfologicznych (wyglądu różnych form), rodzaj pasożyta, a także jego liczebność w określonej jednostce krwi.

bg‑gray2

Inne badania mikroskopowe

Do badań mikroskopowych wykonywanych w parazytologii należą również:

  • badanie rzęs;

  • badanie płynu z torbieli i zawartości cyst;

  • badanie zeskrobin naskórka.

Polegają one na wykryciu osobników dorosłych i/lub jaj pasożytów w preparacie przy użyciu mikroskopu świetlnego.

bg‑orange

Wybrane organizmy pasożytnicze

bg‑gray2

Pasożytnicze bakterie

bg‑gray2

Pasożytnicze pierwotniaki

bg‑gray2

Pasożytnicze płazińce

bg‑gray2

Pasożytnicze nicienie

bg‑gray2

Pasożytnicze pierścienice

R1YimxnbBKnpS
Pijawka lekarska (Hirudo medicinalis) jest pasożytem żywiącym się krwią kręgowców. Może wessać od 10 do 15 ml krwi, którą następnie magazynuje w uchyłkach jelita. Atakuje płazy (głównie żaby), ssaki lub gady.
Źródło: Karl Ragnar Gjertsen, Wikimedia Commons, licencja: CC BY 2.5.
bg‑gray2

Pasożytnicze owady

bg‑gray2

Pasożytnicze pajęczaki

RnBRJUhhBOpG3
Świerzbowiec ludzki (Sarcoptes scabiei) to gatunek zewnątrzpasożytniczych roztoczy. Wywołuje chorobę zwaną świerzbem, która objawia się dokuczliwym świądem i zmianami skórnymi.
Źródło: Kalumet, Wikimedia Commons, licencja: CC BY-SA 3.0.
Ciekawostka

Naukowe podstawy dały parazytologii w XVII w. prace włoskiego lekarza Francesco Rediego na temat morfologii, fizjologii i biologii pasożytów. Szybki rozwój nowoczesnej parazytologii rozpoczął się na przełomie XIX i XX w. Wyjaśniono wtedy, jak przebiegają cykle rozwojowe wielu pasożytów, w tym zarodźca malarii i włośnia.

Słownik

barwienie
barwienie

zespół metod mających na celu wizualizację określonych struktur, elementów komórkowych lub identyfikację związków chemicznych w materiale roślinnym lub zwierzęcym; barwienie preparatów mikroskopowych dokonuje się przez naniesienie barwnika (związku chemicznego) na szkiełko mikroskopowe

faza fali
faza fali

wartość stosowana do opisu zjawisk okresowych; określa stan ruchu w danej chwili

fluorescencja
fluorescencja

zjawisko polegające na emitowaniu fal świetlnych przez cząsteczkę fluorochromu wzbudzoną światłem o właściwej długości fali

fosforescencja
fosforescencja

rodzaj fotoluminescencjifotoluminescencjafotoluminescencji; zanika w stosunkowo długim czasie (w porównaniu z fluorescencjąfluorescencjafluorescencją)

fotoluminescencja
fotoluminescencja

luminescencja zachodząca w wyniku powrotu do stanu podstawowego cząsteczek lub atomów wzbudzonych do wyższych stanów elektronowych promieniowaniem elektromagnetycznym (zakresu widzialnego i nadfioletu)

interferencja fal
interferencja fal

zjawisko fizyczne nakładania się dwóch (lub więcej) fal, przy którym w różnych punktach przestrzeni następuje wzmacnianie lub osłabianie amplitudy fali wypadkowej

parazytologia
parazytologia

(gr. parásitos – współbiesiadnik, lógos – słowo, nauka) nauka o pasożytach; bada rozwój pasożytów, uwzględniając relacje zachodzące między pasożytem a jego żywicielem pośrednim (jeśli występuje) i żywicielem ostatecznym; wyróżnia się: parazytologię ekologiczną, która analizuje wpływ środowiska zewnętrznego na procesy zachodzące w układach pasożyt–żywiciel i na miejsce pasożytów w ekosystemie; parazytologię ewolucyjną, która bada zagadnienia ewolucji pasożytów oraz układów pasożyt–żywiciel; parazytologię medyczną, która bada pasożyty i choroby pasożytnicze człowieka; parazytologię ogólną, która studiuje podstawowe zagadnienia biologiczne dotyczące pasożytów, zjawiska pasożytnictwa i układy pasożyt–żywiciel zarówno w skali indywidualnej, jak i populacyjnej; parazytologię weterynaryjną, która zajmuje się pasożytami zwierząt domowych, udomowionych, łownych, hodowanych w warunkach półnaturalnych

pasożyt
pasożyt

organizm związany (okresowo lub stale) z innym organizmem, który jest jego żywicielem; organizm żyjący i rozwijający się na lub w ciele innego organizmu

pasożytnictwo
pasożytnictwo

(gr. para – obok, sitismos – żywienie) rodzaj związku antagonistycznego pomiędzy dwoma organizmami, z których jeden (pasożyt) czerpie korzyści z drugiego (gospodarza), ponoszącego straty

preparat mikroskopowy
preparat mikroskopowy

obiekt biologiczny przygotowywany w specjalny sposób do analizy podczas obserwacji mikroskopowej; każdy rodzaj mikroskopu wymaga odmiennego sposobu wykonania preparatu

przesunięcie fazowe
przesunięcie fazowe

różnica pomiędzy wartościami fazyfaza falifazy dwóch fal, np. świetlnych

rogówka
rogówka

przezroczysta przednia część błony zewnętrznej oka kręgowców, właściwa także dla człowieka

żywiciel
żywiciel

organizm, w którego ciele żyje i z którego czerpie pożywienie inny organizm, będący pasożytem