Schemat przedstawia kolejne stadia powstawania transgenicznych myszy. To etapy tworzenia myszy knock-out z wykorzystaniem pierwotnych komórek zarodkowych. Poprzez proces celowania genów w komórkach ES, potencjalnie każda pożądana manipulacja genetyczna może być wprowadzona do linii zarodkowej myszy. Specyficzne sekwencje genów mogą być usuwane konstytutywnie lub warunkowo. To knock-out. Wektor docelowy jest transfekowany do komórek ES i rekombinowane klony są badane pod kątem pożądanego zdarzenia rekombinacji homologicznej. Komórki są następnie wstrzykiwane do zarodków przedimplantacyjnych, a powstałe w ten sposób myszy chimeryczne są wykorzystywane do hodowli genetycznie zmodyfikowanej linii myszy zarodkowych. Izoluje się i przechowuje niezależne klony komórek rekombinowanych. Przygotowywane jest DNA i dostarczane na płytkach dołkowych do badań przesiewowych. W następnej kolejności przypuszczalnie pozytywne klony są odmrażane. Zachodzi ekspansja i przesiew potwierdzający. Dochodzi do analizy kariotypu docelowych klonów. Później dochodzi do wstrzyknięcia blastocysty klonów komórek ES. Komórki ES są wstrzykiwane do zarodka przedimplantacyjnego. Generowane i przetrzymywane są mysie chimery przez okres do trzech tygodni. Rekomendowane są możliwie najlepsze strategie hodowlane kolejnych linii zarodkowych myszy. W ten sposób można wygenerować humanizowane modele mysie. Mysz to mały gryzoń. Na skutek rekombinacji genetycznych można uzyskać pożądany kolor czy rozmiar zwierzęcia. Proces polega na usunięciu określonej sekwencji z chromosomalnego DNA, czego konsekwencją jest brak syntezy kodowanego przez ten gen białka. W wyniku usunięcia tej sekwencji w komórkach embrionalnych uzyskuje się organizm pozbawiony cechy kodowanej przez ten gen. Komórki DNA są wstrzykiwane do embrionalnych komórek DNA przy pomocy elektroporacji. W wybranych komórkach w warunkach in vitro zachodzi rekombinacja homologiczna, na przykład delekcja danego genu. Dochodzi do wprowadzenia komórek macierzystych do blastocysty. Następuje transfer blastocysty do macicy matki zastępczej. Powstają chimery, których organizm składa się zarówno z komórek zmodyfikowanych, jak i niezmodyfikowanych genetycznie. Dochodzi do krzyżowania organizmu chimerycznego z niezmodyfikowaną genetycznie homozygotą. W pierwszym pokoleniu otrzymuje się homozygoty nie posiadające zmodyfikowanego genu. Na schemacie to myszy białe. Oraz heterozygoty, które posiadają chromosom ze zmodyfikowanym fragmentem DNA w każdej komórce ciała. To myszy czarne. Po skrzyżowaniu dwóch heterozygot część osobników potomnych będzie homozygotami z całkowicie wyłączonym genem na obu chromosomach homologicznych, a część będzie posiadała niezamieniony gen na jednym lub obu chromosomach homologicznych. Etapy tworzenia zwierząt transgenicznych: Przygotowanie fragmentu DNA. Wprowadzenie i namnożenie przygotowanego DNA do komórek macierzystych. Przeniesienie DNA za pomocą wektorów do blastocysty. Implantacja blastocysty w macicy matki zastępczej. Krzyżowanie chimery z niezmodyfikowaną genetycznie homozygotą. Otrzymanie wśród organizmów potomnych homozygot nieposiadających zmodyfikowanych genów oraz heterozygot posiadających zmodyfikowany gen w każdej komórce ciała. Krzyżowanie heterozygot w celu otrzymania homozygot z całkowicie wyłączonym genem na obu chromosomach homologicznych.