Problem naukowy: Czy gronkowiec złocisty (Staphylococcus aureus) i pałeczka okrężnicy (Escherichia coli) barwią się tak samo przy zastosowaniu metody Grama?

Hipoteza: W wyniku barwienia metodą Grama gronkowiec złocisty (Staphylococcus aureus) i pałeczka okrężnicy (Escherichia coli) barwią się na kolor filetowy.

Sprzęt laboratoryjny:

2 szkiełka podstawowe;

pęseta/szczypce;

marker;

palnik,

rękawiczki lateksowe;

eza metalowa;

pipeta Pasteura;

mikroskop świetlny z obiektywem immersyjnym 100× (mokrym, „oil”);

metalowa wanienka do barwienia.

Odczynniki:

szalka Petriego ze szczepem np. gronkowca złocistego (Staphylococcus aureus) – bakterią Gram‑dodatnią;

szalka Petriego ze szczepem np. pałeczki okrężnicy (Escherichia coli) – bakterią Gram‑ujemną;

sól fizjologiczna;

zestaw do barwienia metodą Grama (fiolet krystaliczny, płyn Lugola, odbarwiacz – etanol skażony 70%, fuksyna zasadowa);

woda destylowana;

olejek immersyjny;

kawałek mydła;

bibuła.

Instrukcja wykonania doświadczenia:

Przed wykonaniem utrwalonego preparatu, odtłuszczono szkiełko podstawowe mydłem, a następnie oczyszczono bibułą. Preparat opisano markerem, oznaczając go jako „1”.

Na środek szkiełka pipetą naniesiono kroplę soli fizjologicznej. Wyżarzono ezę, trzymając ją pionowo przez kilka sekund w płomieniu palnika. Poczekano do jej ostygnięcia. Za pomocą ezy przeniesiono jedną kolonię bakterii z szalki S. aureus i delikatnie rozmazano ją w kropli.

Suchy preparat chwycono pęsetą. Utrwalono go w płomieniu palnika, przez trzykrotne przesunięcie szkiełka nad płomieniem. Poczekano aż preparat ostygnie.

W taki sam sposób przygotowano preparat z szalki E. coli. 

Wykonanie barwienia. Przygotowano wanienkę do barwienia w zlewie. Na jej metalowych rurkach umieszczono szkiełka podstawowe z utrwalonymi preparatami. Preparaty zalano fioletem krystalicznym, odczekano 60 sekund. Na preparaty naniesiono płyn Lugola, odczekano 30 sekund.

Opłukano preparaty wodą destylowaną przy pomocy tryskawki. Preparaty odbarwiono etanolem skażonym. Po ok. 10 sekundach, opłukano preparaty wodą destylowaną przy pomocy tryskawki. Na preparaty naniesiono fuksynę zasadową, odczekano 30 sekund.

Opłukano preparaty wodą destylowaną przy pomocy tryskawki. Dalej osuszono preparaty bibułą. Pozbawione wilgoci obejrzano pojedynczo w mikroskopie świetlnym z obiektywem immersyjnym, powiększenie 100×.

Obserwacje

Komórki gronkowca złocistego (1) (S. aureus) w wyniku barwienia Grama barwią się na fioletowo.

Komórki pałeczki okrężnicy (2) (E. coli) w wyniku barwienia Grama barwią się na różowo.

Wnioski

Barwienie metodą Grama pozwala odróżnić bakterie Gram‑dodatnie od bakterii Gram‑ujemnych.

Gronkowiec złocisty (1) (S. aureus) należy do bakterii Gram‑dodatnich, ponieważ w wyniku barwienia Grama barwi się na fioletowo.

Pałeczka okrężnicy (2) (E. coli) należy do bakterii Gram‑ujemnych, ponieważ w wyniku barwienia Grama barwi się na różowo.