Wirtualne laboratorium WL‑S
Korzystając z wiedzy na temat metod transformacji genetycznych, zaplanuj i przeprowadź doświadczenie, które pozwoli ci rozwiązać poniższy problem badawczy. Hipotezę, wyniki i wnioski zanotuj w formularzu.
Korzystając z wiedzy na temat metod transformacji genetycznych, zapoznaj się z opisem doświadczenia, które pozwoli ci rozwiązać poniższy problem badawczy. Hipotezę i wnioski zanotuj w formularzu.
Problem badawczy:
Jaka jest skuteczność mikroiniekcji genu zielonej fluorescencji do mysich zarodków?
Materiał biologiczny:
mysz będąca donorem zapłodnionych komórek jajowych;
mysz będąca matką zastępczą.
Odczynniki:
wyizolowany gen białka zielonej fluorescencji.
Sprzęt laboratoryjny:
mikroskop;
mikromanipulator;
pipety do mikroiniekcji;
szalka Petriego;
probówka Eppendorfa na kuwecie z lodem.
Zasób interaktywny dostępny pod adresem https://zpe.gov.pl/a/DpWziBXsG
Instrukcja wykonania doświadczenia:
1. Pobieramy komórki jajowe od donora i umieszczamy je na szalce Petriego.
2. Umieszczamy szalkę Petriego z komórkami na stoliku mikroskopu z przygotowanym mikromanipulatorem.
3. Pobieramy DNA zawierające gen białka zielonej fluorescencji do igły i umieszczamy ją w ramieniu mikromanipulatora. Pod mikroskopem widoczne są komórki jajowe z dwoma jądrami komórkowymi.
4. Przysuwamy tępo zakończoną pipetę do komórki, żeby ją unieruchomić, a następnie wbijamy igłę do jądra komórkowego i wtłaczamy do niego DNA. Ukazuje się połączenie obu jąder w każdej komórce (czyli dużego jądra z małym) oraz pierwsze podziały zarodka.
5. Powtarzamy poprzedni krok dla pozostałych komórek.
6. Po podziałach zarodka, zarodki przenoszone są do matki zastępczej. Kalendarz informuje o upływie 3 tygodni, po czym pojawiają się 3 młode myszy.
7. Po urodzeniu myszy sprawdza się wydajność transformacji gasząc światło. Jedna z trzech nowonarodzonych myszy świeci w ciemności (oczy, łapki, pyszczek, ogon, uszka).